Несмотря на большое разнообразие иммунологических методов определения реактивности организма, в настоящее время все еще продолжают поиски новых методов, которые не были бы слишком громоздки либо слишком длительны во времени, достаточно чувствительны и специфичны.
В своих исследованиях мы использовали новые иммунологические методы, не применяемые ранее в профессиональной дерматологии: метод капиллярной хроматографии на бумаге (КхБ) и Уанье («реакция помутнения»).
Параллельно мы исследовали специфическую чувствительность кожи к химическим веществам, с которыми больной имел контакт на производстве.
Кожные пробы с химическими аллергенами исследовались капельной и компрессной методикой В. В. Ивановым, А. П. Долговым, Н. С. Ведровым, Егер Ядассон-Блохом. Внутрикожные пробы с бактериальными аллергенами (стафилококковым анатоксином и туберкулином) мы проводили по методике, разработанной аллергологической лабораторией АМН СССР.
Для внутрикожных проб используют стеклянные шприцы только туберкулинового типа с делениями 0,01—0,02 мл и тонкие иглы с коротким острием. Иглы и шприцы после употребления кладут в воду, тщательно промывают теплой проточной водой и погружают на 15 мин в 10% раствор сульфата магния, подогретый до 40—50 °С. После этого тщательно промывают теплой проточной водой и кипятят 10—15 мин в 4% содовом растворе, снова промывают теплой проточной водой и только после этого кипятят в дистиллированной воде в течение 30—40 мин, затем шприцы высушивают (простое кипячение не удаляет аллерген).
Шприцы и иглы не подлежат обработке спиртом. Для каждого аллергена и тест-контрольной жидкости необходим отдельный маркированный шприц.
Результаты оценивают по четырехбалльной системе, как принято в серологических реакциях. Реакцию читают через 10—20 мин (реакция немедленного типа). До постановки внутрикожных тестов не дают антигистаминные препараты в течение 3 дней.
Сущность метода КхБ заключается в том, что смесь испытуемой сыворотки (антитело) и антигена в равных объемах по 0,2 мл заливают в лунки специального штатива, затем сыворотки предварительно разводят изотоническим раствором хлорида натрия (рН 7,0—7,2). Сыворотки используются в 2-, 3- или 10-кратном разведении. Антиген применяют в рабочей дозе, последнюю определяют титрованием антигена. Смесь сыворотки с антигеном выдерживают в термостате при 37 °С в течение 30 мин, а затем охлаждают в холодильнике при 4°С в течение 15—30 мин.
В результате взаимодействия антитела и антигена образуется комплекс, который выпускается через тонкие стеклянные капилляры на хроматографическую бумагу 7X12 см. Жидкость из лунок поднимается по капиллярам, и преципитат, если он образовался, как более крупная молекула останавливается на месте соприкосновения бумаги с капилляром. Хроматограммы высушивают и проявляют в обычном сулемовом растворе с бромфеноловым синим и промывают несколько раз, вначале 20% раствором уксусной кислоты, а затем дистиллированной водой, и опять сушат. Отсутствие преципитата считается отрицательной реакцией. Для каждой исследуемой сыворотки ставится контроль на сыворотку и антиген. Контрольные пробы не должны оставлять на бумаге пятен преципитации. Одним из важных моментов метода КхБ является тщательная очистка сыворотки, которая перед опытом должна быть отцентрифугирована при 5000 об/мин в течение 15 мин и профильтрована.
